Анализ витаминов

   Водорастворимые Витамины

   Обращенно-фазная колонка Vydac SP рекомендована для анализа водо-растворимых витаминов. Она изготовлена из сферического силикагеля с размером пор 90A и большой площадью поверхности.    Возможно применение двух фаз: 201SP, с фазой C18, и 208SP, с фазой C8. Обе фазы мономерно привитые с полностью покрытой поверхностью. Колонки SP имеют, присущую высокую эффективность, которая не зависит от дезактивации или модификации растворителя. Они очень стабильны, с продолжительным временем жизни в нормальных условиях. Качественный тест включает определение эффективности и чувствительности для водо-растворимых витаминов.

   Рисунок 1. Тест селективности витаминов для 201SP. Пики:(1) аскорбиновая кислотаd (C),(2) никотиновая кислота (Niacin), (3)пиридоксин (B6),(4) тиамин (B1),(5) никотинамид (B3), (6) фоливая кислота (M),(7) цианокобаламин (B12),(8) рибофлавин (B2). Все пики должны разделяться до базовой линии.

   Рисунок 2. Тест селективности витаминов для 208SP. Пики:(1)аскорбиновая кислота (C),(2) никотиновая кислота (Niacin),(3)пиридоксин (B6),(4)тиамин (B1), (5)никотинамид (B3). Все пики должны разделяться до базовой линии.

   Жирорастворимые витамины

   Витамины A, E, и B -каротин были отделены от мешающих неактивных геометрических изомеров и определены ОФ хроматографией на колонке Vydac 201TP54 (Ссылки. 2 и 3).

   Vydac 201TP широко пористый (300A) специальный C18 обращенно-фазный сорбент оригинально разработанный для оптимального разделения ПАУ в экологических анализах. Как отмечено в ссылке 2, большие поры (300A) TP силикагеля вносят вклад в селективность разделения длинных, жестких молекул витаминов A, E, и B -каротина обеспечивающим их не смывание с активной поверхности сорбента.

 

   Рисунок 3. Разделение изомеров ретинола. Геометрические изомеры легко разделяются на ОФ сорбенте Vydac 201TP 300A C18. Пики: 1.би-цис-ретинол;2.11-цис-ретинол;3.9-цис-ретинол; 4.13-цис-ретинол;5. все-транс-ретинол (vitamin A). Хроматограмма взята с разрешения авторов из ссылки 3.

   Рисунки 4 и 5 иллюстрируют использование Vydac 201TP колонок для определения витаминов A, E, и B-каротина в сыворотке и анализ витамина D.

   Рисунок 4. Определение витаминов A, E, и B -каротина в сыворотке. В реальном анализе хроматографическое разделение этих молекул от их изомеров зависит от влияния матрицы. Аналиты могут быть определены электрохимическим или фотометрическим. Здесь показана следовое УФ-детектирование с программированием длинны волны.

   Peaks:
   1. all-trans -retinol (vitamin A)
   2. tocol
   3. y -tocopherol
   4. a -tocopherol (vitamin E)
   5. lutein
   6. zeaxanthin
   7. cryptoxanthin
   8. a -carotene
   9. all-trans -B -carotene
   10. cis -B -carotene

   Витамины D2 и D3
   Сильно водонерастворимые витамины D2 (кальциферол) и D3 (холекальциферол) могут мыть анализированы с помощью ВЭЖХ с использованием специальной обращенно-фазной колонки Vydac 201TP54 с помощью полностью безводной подвижной фазы (Ссылка 8). Этот метод превосходит использование нормально-фазной ВЭЖХ, для которой воспроизводимость времен удерживания более трудно достижимо.

   Рисунок 5. Разделение витаминов D2 и D3. Время элюирования требуемое для разделения определяется концентрацией метанола в подвижной фазе. Это может быть использовано для отделения мешающих пиков, в зависимости от анализируемой матрицы.